在細(xì)胞生物學(xué)研究中,亞細(xì)胞的分級分離是基礎(chǔ)也是關(guān)鍵的步驟。研究細(xì)胞和細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分需要分離特定的膜相系統(tǒng)和細(xì)胞器,包括細(xì)胞膜、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細(xì)胞核、線粒體、溶酶體、過氧化物酶體和細(xì)胞骨架等,有時還需要分離高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌的囊泡。
為了進(jìn)一步研究細(xì)胞器的核膜,需要將已分離的細(xì)胞器進(jìn)一步破碎和分離。分離細(xì)胞器和細(xì)胞膜一般是在適合被分離細(xì)胞器和細(xì)胞膜的介質(zhì)里把細(xì)胞或組織破碎,使細(xì)胞中的成分釋放到介質(zhì)中,稱為勻漿,有多種方法能夠達(dá)到這一目的,包括物理、生物和化學(xué)方法。根據(jù)細(xì)胞器、細(xì)胞膜的大小和密度采用落地式大容量冷凍離心機(jī)差速離心法進(jìn)行粗分離,再采用等密度區(qū)帶離心法或速率區(qū)帶離心法進(jìn)行純化。由于分離細(xì)胞器和細(xì)胞膜具有明顯的密度差異,在分離過程中主要采用階梯梯度法和一步屏障法分離,特殊情況下采用連續(xù)梯度法分離。
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